Метод Бредфорда
Материал из m-protect.ru
Метод Бредфорда — один из колориметрических методов количественного определения белков в растворе. Предложен Мерионом Бредфордом (англ. en:Marion M. Bradford) в 1976 году. Статья М. Бредфорд в журнале Anal Biochem, посвященная методу количественного определения белка в растворе, является одной из самых цитируемых научных статьей в мире.
Принцип
Метод основан на реакции красителя кумасси (coomassie) с аргинином и гидрофобными аминокислотными остатками. Связанная форма имеет голубую окраску с максимумом поглощения при 595 нм. Таким образом увеличение адсорбции раствора при длине волны, равной 595 нм, пропорционально количеству белка в растворе.
Метод дает хорошее значение концентрации белка в пределах от 2 мкг/мл до 120 мкг/мл (в этих границах соблюдается линейная зависимость увеличения адсорбции от концентрации, в целом чувствительность метода зависит от соотношения концентраций определяемого белка и красителя: чем больше красителя, тем чувствительней метод), менее "капризный" по сравнению с методом Лоури.
