Хиральная жидкостная хроматография

Материал из m-protect.ru

Перейти к: навигация, поиск

Хиральная жидкостная хроматография (chiral LC) применяется для разделения и количественного анализа зеркальных изомеров (энантиомеров) оптически активных органических соединений.

Поскольку разные энантиомеры биологически активных веществ обладают разным действием на организм, хиральная хроматография наиболее часто применяется для анализа фармацевтических препаратов и полупродуктов их синтеза. Другой областью ее применения является органическая химия хиральных соединений. Таким образом, пробы могут представлять собой не только растворы чистых веществ, но и реакционные смеси. По этой причине неподвижные фазы для хиральной ВЭЖХ, наряду с высокой селективностью разделения энантиомеров и универсальностью, должны обладать также как можно большей эффективностью.

Современные хиральные неподвижные фазы (chiral stationary phases, CSPs) на основе силикагеля обладают эффективностью порядка 30-80 тыс.т.т./м по оптически неактивным тестовым соединениям. По энантиомерам достигаемая эффективность всегда меньше предельной, поскольку многоточечное взаимодействие адсорбента с хиральными адсорбатами, необходимое для их дискриминации, всегда приводит к ухудшению кинетики массообмена, и, следовательно, эффективности.

Хиральное разделение в большинстве случаев проводится в режиме нормально-фазовой хроматографии, однако в последнее время также довольно часто – в режимах обращенно-фазовой и гидрофильной хроматографии. В нормально-фазовом режиме удерживание определяется суммой нормально-фазового и квази-нормально-фазового типов, в обращенно-фазовом и гидрофильном режимах – суммой обращенно-фазового, нормально-фазового и ионообменного типов.

К сожалению, в хиральной ВЭЖХ пока еще нет ни одной достаточно удовлетворительной теории, при помощи которой можно было бы заранее оценивать величину расщепления произвольной пары энантиомеров на какой-либо хиральной фазе. При необходимости разделить на энантиомеры новую рацемическую смесь обычно вначале испытывают наиболее универсальные фазы из имеющихся. Затем, в случае неудачи, переходят к менее универсальным, или же пытаются достичь разделения за счет варьирования условий хроматографирования: состава элюента и температуры. При этом многое зависит от интуиции и практического опыта хроматографиста.

Особым видом хиральной хроматографии является метод динамической хиральной ВЭЖХ. Его отличительной особенностью является то, что время превращения одного элюируемого энантиомера в другой сравнимо со временем их элюирования. Динамический вариант хиральной хроматографии применяется, к примеру, для разделения атропоизомеров – соединений, хиральность которых обусловлена заторможенным вращением вокруг одинарной связи. Полное разделение энантиомеров таких соединений осуществляется при пониженных температурах, необходимых для «замораживания» вращения.

При высокой температуре на хроматограмме атропоизомера наблюдается лишь один пик. При понижении температуры пик расщепляется на два пика с характерной «перемычкой» между ними. Два полностью разрешенных пика наблюдаются при низкой температуре. Подобные эсперименты применяются для определения энергии активации взаимопревращения атропоизомеров.

Личные инструменты